3) 개대 배양 준비물: PDA 배지,패트리디쉬,삼각프라스크
① 필요량의 PDA 배지를 만들고 삼각 프라스크에 분주한다.
② 삼각프라스크에 마개를 막고 알루미늄호일로 물이 들어가지 않게 싸준다.
③ 121℃에서 살균을 30분 정도 한다.
④ 살균후 배기 밸브를 잠그고 압력이 0이 된후 4시간 정도 그냥 둔다.
⑤시험관의 균사체를 2-3mm 크기로 잘라 패트리디쉬 중앙부에떨어트린다.
⑥ 뚜껑을 닫고 샐룰러 테이프로 경계부를 감아준다.
⑦ 20℃ 인큐베이터에 보관하여 균사가 90~95% 자란후 활력이가장 왕성한 패트리디쉬를 고른다.
4) 액종균 1 준비물:PDA 배지,마그네틱바,솜,교반기,진탕기
액체 배지:물 1ℓ에 대두분 3g, 황설탕 20g, 황산마그네슘 0.5g,
제일 인산칼슘 0.5g 잘 녹여서 만든다.
① 1ℓ 삼각 프라스크에 약 500cc PDA 배지를 넣는다.
② 삼각프라스크에 솜이나 실리스토퍼 마게로 막고 알루미늄 호일로 싼다.
③ 121℃에서 30분 살균한다.
④ 양압이 유지된 상태에서 크린벤치내에서 냉각한다.
⑤ 패트리디쉬 균사를 3~4mm 잘라서 균사 2-3개을 풀라스크에접종한다. (크린벤치내)
⑥ 접종후에는 청결한 곳에서 6일정도 정체 배양후 진탕 배양한다.삼각 프라스크 온도 20~22℃ 적당하다.
⑦ 삼각 프라스크 배양은 18~20일 정도면 배양이 끝난다.액탱크에 접종하기 위하여 교반기에서 균사를 깬다.
여기까지는 실험실에서 전문가분께서 제조하기 때문에
문제없이 잘할것으로 본다.
5) 액종균 탱크 배양: 액 탱크,대두박,황산 마그네슘,소포제,황설탕,
제일 인산갈슘
① 탱크에 물을 받는다.
② 대두박 파우더와 각종 첨가제를 물에다 희석한다.(물 1ℓ 기준에 대두박
3g,활성탕 20g,황산마그네슘 0.5g,제일 인산칼슘 0.5g 비율로 용량에
따라 결정하여 회석하고 소포제는 성능에 따라 사용량 결정)소포제의 기능 : 액탱크 배양중에 기포발생 방지……
③ 액 탱크에 재료를 투입후 살균기에 넣고 100℃에서 30분, 121℃에서
90분 살균한다.
④ 살균후 물샤워를 하여 냉각한다.(양압이 걸린 상태에서 20℃<까지>)
⑤ 냉각 완료후 액 탱크에 양압이 걸린 상태에서 크린브스로 이동한다.
⑥ 크린브스내에서 양압을 걸린 상태에서 30분가량 가만둔다.
⑦ 탱크 접종전 접종구 주변 알코올을 뿌려서 화염 살균후 접종구를
열고(삼각프라스크도 화염 소독후 마개를 열고) 접종을 한다.
액탱크도 접종시 양압 유지, 접종은 신속하고 정교하게한다. (접종량은 풀라스크 1개)
⑧ 탱크에 접종을 한다음,양압상태에서 이동을 하여 배양Line에 연결한다.
⑨ 배양기간은 방법에 따라 다소 차이는 있으나 대개 7~8일이면 배양이 다된다.
액 탱크 살균이후부터는 Air 접속구가 오염이 되지 않도록 철저하게
관리하여야 한다. (접종 노즐도 살균하여 오염이 되지 않게 철저하게
관리하여야 한다.)
접종노줄과 연결시 오염율이 많이 발생 주의
